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miArrest? miRNA抑制剂
miArrest? miRNA抑制剂
miRNA抑制剂可以特异、高效地抑制生物体内源性miRNA的活性，是研究miRNA功能缺失的重要工具。复能基因提供慢病毒或非病毒载体的miArrest? miRNA抑制剂表达克隆和化学合成的miRNA抑制剂。miArrest? miRNA抑制剂克隆可以特异性地结合目的miRNA，瞬时和稳定地抑制miRNA的功能，采用H1或者U6启动子驱动转录可以保证在大多数哺乳动物细胞中高水平表达。
图1. 不同剂量miArrest? miRNA抑制剂克隆对靶miRNA抑制作用的对比
HEK293细胞中共转染miR-125a 抑制剂表达质粒 (GeneCopoeia HmiR-AN0094-AM01) 、miR-125a 前体表达质粒(GeneCopoeia HmiR0309-MR03) 和miR-125a的靶标克隆质粒(GeneCopoeia HmiT019205-MT02：将LIN28 的3’UTR克隆到Gaussia荧光素酶-碱性磷酸酶双报告载体)。转染24小时后检测报告基因Gaussia 荧光素酶和参照基因碱性磷酸酶的活性。只转染Gluc-LIN28-3’-UTR质粒的细胞中Gaussia 荧光素酶与碱性磷酸酶活性比值设为1 (左数第一条柱)，用来标准化其他细胞样品中的报告基因活性。结果表明miR-125a抑制了Gluc-LIN28-3’-UTR中Gluc 70%以上的活性（左数第二条柱）。这种抑制效应可被导入的不同剂量的miR-125a抑制剂表达质粒特异性的阻遏。转染100 ng 抑制剂表达质粒时，细胞内报告基因/参照基因活性比值（右数第一条）已超出单独转染Gluc-LIN28-3’-UTR报告质粒的对照组。这说明miR-125a抑制剂可以阻遏外源和内源性的miR-125a对靶标基因的抑制，提高GLuc-LIN28-3’-UTR转录本的翻译水平。
表1. 基于克隆表达载体的和化学合成的miRNA抑制剂的比较
图2. miRNA抑制剂表达克隆的作用机理
miRNA 抑制剂克隆导入细胞后表达的miRNA抑制剂(miArrest)特异地结合它们的靶miRNA。miRNA抑制剂转录后折叠形成一个稳定的陷阱结构，可以结合两分子靶miRNA。miArrest?高效、特异地结合细胞内成熟的靶miRNA，阻止了miRNA对靶标mRNA的降解或者翻译抑制，上调miRNA靶标基因的表达。独特的载体设计确保最大的特异性、抑制强度、抑制作用持久度和最低的脱靶效应。