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产品信息
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miTarget? miRNA 3′ UTR 克隆
复能基因提供哺乳动物表达载体的人、小鼠、大鼠miRNA 3′ UTR克隆，可用于miRNA靶标验证、预测靶标的功能确证和miRNA对靶标的调控作用的研究。
本公司提供两套3’UTR报告载体。在pEZX-MT05载体中，我们将3’UTR序列（来源于公开的基因序列数据库）插入到Gaussia荧光素酶报告基因下游，在哺乳动物细胞中由SV40启动子驱动转录生成Gaussia荧光素酶（Gluc）和3’UTR靶标序列的嵌合mRNA，因此无需裂解细胞实时监测Gluc的表达，研究mRNA-miRNA的相互作用。在相同载体（pEZX-MT05）上带有分泌型碱性磷酸酶（SEAP）报告基因。CMV启动子驱动转录的SEAP作为同质粒内的对照，这种双报告系统可以对多样本常规转染进行精确比较。
pEZX-MT06是Firefly/Renilla双荧光素酶报告载体。3’UTR序列在Firefly（hLuc）荧光素酶报告基因下游，CMV启动子驱动转录的Renilla（hRLuc）作为同质粒内的对照。通过裂解细胞检测hLuc和hRLuc的表达。
已知LIN28基因是miR-125a的靶标。HEK 293细胞转染Lin28 miRNA靶标序列表达克隆（左）或者共转染miR-125a前体miRNA表达克隆（右）。转染24小时后检测GLuc 和内参SEAP活性。仅转染Lin28 miRNA靶标序列表达克隆的细胞中Gluc和SEAP活性之比定为1（左），以此确定共转样本中的比值。如图所示，miR-125a抑制了GLuc-LIN28-3′-UTR克隆中Gluc 70%以上的活性。
产品优势
可进行活细胞分析
分泌型GLuc报告基因
无需裂解细胞
节省时间和样本，减少突变，简化试验流程
双报告载体系统
可以对多样本常规转染进行精确比较
高通量兼容
多个样本可同时分析
高灵敏度
GLuc比萤火虫或Renilla荧光素酶灵敏度高1000倍
使用方便
所有靶标（3′ UTR）克隆均可用于即时转染
复能基因提供超过18,000种人、18,000种小鼠和10,000种大鼠不同载体的预制3’UTR表达克隆。
需要定制3′ UTR克隆? 请发邮件到support@igenebio.com.